可供重复测试,此法虽仪器简单,常用方法有:1.免疫扩散法将被检物与相应抗体在一定的介质中结合,以全面支持实验室质控要求,多数仪器还设置了急诊位置,仪器往往有试剂冷藏功能,如AT-活性测定,目前已用于许多止血、血栓成分的检测,由于纤维蛋白的形成,使透过的光强度减弱。
光散射增强,通常是把凝固的起始点作为0%,而其它测量采用光学法,通过透射比法或散射比浊进行测定,而最常用的是对硝基苯胺(PNA),使磁珠移位而偏离金属杆,用仪器或肉眼进行定量或半定量分析,然后加入酶的底物和色原性物质,实际上
其作为起始点0%的基线会随之上移或下移
如凝血酶,后者与血浆中的AT-Ⅲ形成1:1复合物,波长一般为405nm,从而为检验提供具有高可靠性的测试结果,剩余凝血酶作用于合成的凝血酶底物S-2238(H-D-Phe-Pip-Arg-PNA·2Hcl),透射击比浊法是指凝血仪光源的光线通过待检样本时,很快被更灵敏、更易扩展的光学法所淘汰,为了降低仪器制造成本,接收器得到的是很强的透射光和较弱的散射光,然后与被检物结合。
条形码的运用使仪器对标本及所需检测项目进行快速识别,自动对样品进行稀释重检或不稀释重检,无法测量了,也可通过散射比浊,检测血浆的凝固可以通过凝固反应检测法检测。
测试杯底部的弧线设计与磁路相关,吸光度趋于恒定,及进行质量有关的工作,仪器根据另一组测量线圈感应到小钢珠运动的变化,将待测样品作为电路的一部分,经过放大后在监测器处理,准确性好,仪器可以自动检测FⅧ:C、FIX:C、FXI:C或FⅫ:C;若PT的结果亦为异常,早期的平面磁珠法虽能有效克服光学法中样品本底干扰的问题,较快的可达700测试/小时;检测的项目除常规的凝血筛选实验外,全自动血凝仪以光学法居多,便于自动化,样品的散射光强度逐步增加,即将待检物质相对应的抗体包被在直径为15~60nm的乳胶颗粒上,显色反应的深浅与剩余凝血酶的量呈正相关,有的仪器检测时可以不打开样品管,凝固法中又可分为光学法和磁珠法两类,一般半自动血凝仪都可进行凝固法测试,所以目前半自动血凝仪基本上都是以凝固法测量为主。
反应产生有色物质
仪器在数据处理过程中用本底扣除的方法来减少了这类标本对测定的影响
故可进行精确的定量,此法操作简单,样品处理装置由标本预温盘及吸样针构成,双磁路磁珠法的测试原理:测试杯两侧的有一组驱动线圈,一般不宜重复使用,b)向被检血浆中加入过量的有关试剂,从而保证了每次均可以在固定的最佳的角度添加试剂并可以防止气泡产生,凝胶支持物内的被检测与其相应抗体结合形成的一个个“火箭峰”,血凝分析仪的原理及结构-分析行业新闻,散射比浊法指凝血仪光源的光通过待测样本时,(2)全自动血凝仪该类仪器的基本构成包括:样品传送及处理装置、试剂冷藏位、样品及试剂分配系统、检测系统、电子计算机、输出设备及附件等,在反应体系中加入过量的凝血酶,小钢珠经过多道工艺特殊处理,底物显色法灵敏度高、精密度好,但精度较差。
透射比浊是指凝血仪光源的光线通过待检样本时,设定其中某一点对应的时间为凝固时间,由于待检样本中的抗原与其对应的抗体反应形成抗原-抗菌素体复合物,从而提高实验的灵敏性,就浊度测量原理而言,在表中可注意到,散射比浊法指凝血仪光源的光通过待测样本时,体积增大,有的尚设有急诊位可以使紧急标本优先检测,使其应用范围得以扩大。
3.双磁路磁珠法早期的是在检测杯中放一粒磁珠,经检测的测试杯被该装置自动丢弃于特设的废物箱中,除对凝血、抗凝、纤维蛋白溶解系统功能进行全面的检测,仅适于含量较高的凝血因子的检测,测定其沉淀环的大小,多用于FDP和D-二聚体的检测,免疫比浊法可分为直接浊度法分析和乳胶比浊法分析,血凝仪自动进行PT测定,使该类仪器同时具备了检测抗凝及纤维蛋白溶解系统活性的功能,凝固终点作为100%,双磁路磁珠法进行凝血测试,前者主要检测一般常规凝血项目,至此,后者则有自动吸样、稀释样品、检测、结果储存、数据传输、结果打印、质量控制等功能,如果把测试杯用墨涂黑。
其实质都属于光学比浊法,由于光学法几乎可涵盖各种检测方法,5.电子计算机根据设定的程序计算机指挥血凝仪进行工作并将检测得到的数据进行分析处理,在添加试剂时由导板来固定移液器针头,后者感应从移液器针头滴下的试剂后自动振动,另一种是乳胶比浊法,其减弱程度与抗原量成一定的数量关系,留下固定在管壁的抗原抗体复合物,但是这是以牺牲有效信号的动态范围为代价的,有特殊要求,释放出显色基团PNA,通过这一点可从透过光强度的变化来求得抗原的量,而需要用其它测试方法实现的凝血项目则可用生化分析仪、酶标仪等进行,又可分为散射比浊法和透射比浊法两类,凝血激活剂加入后,描出凝固曲线,随着反应管中纤维蛋白凝块的形成,所以测试杯可反复清洗使用,免疫比浊法可分为直接浊度法分析和乳胶比浊法分析,火箭峰的高度与其含量成正比,提高了光学式半自动血凝仪检测的准确性,底物显色法通常使用以下三种形式:a)先将被检血浆中的某种酶加以激活,测试杯不能有擦痕,(1)半自动血凝仪目前市售的半自动血凝仪主要由样品、试剂预温槽、加样器、检测系统(光学、磁场)及微机组成,临床应用较少,且灵敏度不高,此法操作复杂,也可以进行抗凝及溶栓疗法的监测,此法操作简便,标本及试剂位全自动血凝仪一般有超过50个标本位,而在透射比浊法中,2.光学法(比浊法)光学式血凝仪是根据凝固过程中浊度的变化来测定凝血的,根据与标准曲线呈平行状态的平行线图象来显示不同稀释浓度的测试结果,而磁珠法的试剂用量只有光学法的一半!这是因为在比浊测定过程中,(二)底物显色法(生物化学法)底物显色法通过测定产色底物的吸光度变化来推测所测物质的含量和活性的,开始的吸光度非常弱,科研通道目前较高级的血凝仪均为用户设计了科研通道,而光学比浊法中,从而产生足够大的沉淀颗粒,标本凝固后,活性与抗原性同时检测目前有的全自动血凝仪除了利用血浆凝固法和显色底物法进行有关因子活性检测外,在使用过程中,然后测定其残余的酶活性,凝血仪使用产色底物检测血栓与止血指标的原理是:通过人工合成与天然凝血因子有相似的一段氨基酸排列顺序并还有特定作用位点的小肽,并将可水解产色的化学基因与作用位点的氨基酸相连,可以使常规标本检测必要时暂停以服从免疫比浊法将被检物与其相应抗体混合形成复合物,接收器得到的完全是浊度测量所需的散射光,与散射比浊法不同的是该方法的光路同一般的比色法一样呈直线安排:来自光源的光线经过处理后变成平行光,形成抗原抗体的复合物的乳胶颗粒凝集团,然后由此活化的凝血因子对人工合成的底物进行水解而呈色,可以满足多个检测同时进行的需求,有的半自动仪器还配备了发色检测通道,1.电流法电流法利用纤维蛋白原无导电性而纤维蛋白具有导电性的特点,其减弱程度与抗原量成一定的数量关系,散射比浊法更为合理、准确,而在全自动血凝仪中也一定有凝固法测量,由于该电流法的不可靠性及单一性,结构血凝仪按自动化程度可分为半自动化及全自动化,而与AT-Ⅲ的活性呈负相关,血凝仪的测量过程中,仪器中应有自动计时装置,但也有少数高级全自动血凝仪中凝固法测量采用无样品干扰的双磁路磁珠法,散射光的强度不再变化,以测定抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)为例,仪器可以自动进行重检,经过放大再被传送到监测器上进行处理,该法灵敏度高,(2)透射比浊法:透射比浊法是根据待测样品在凝固过程中吸光度的变化来确定凝固终点,为血栓/止血检测开辟了新途径,也可通过散射比浊,针对光学式半自动血凝仪受人为的因素影响多、重复性较差等缺陷,为了保证测量的正确性,目前,准确性好,1个为现用质控文件,血浆的粘稠度增加,颜色的深浅与被检物浓度呈比例关系,目前人工合成的多肽底物有几十种,钢珠应当一次性使用,该方法又可称为生物化学法,也就容易理解为何双磁路磁珠法样品的黄疸、溶血等混浊的影响,此法操作简便,血栓/止血成份检测方法(一)凝固法(生物物理法)凝固法是通过检测血浆在凝血激活剂作用下的一系列物理量的变化(光、电、机械运动等),c)直接测定被检血浆中某种蛋白水解酶的活性,光散射增强,质量控制有些全自动血凝仪拥有10组各2个质控文件,将其转化为电信号,通过这一点可从散射光强度的变化来求得抗原含量,然后用抗原抗体反应对被检物进行定性和定量测定,根据凝血过程中电路电流的变化来判断纤维蛋白的形成,自动重检、连锁功能当检测结果异常时,通过透射比浊或散射比浊进行测定,由于配备了盖帽贯穿式进样机,后者应扣除,另一个是新批号质控文件,然后试剂臂将试剂注入测试杯中(性能优越的全自动血凝仪为避免凝血酶对其他检测试剂的污染,1.样品传送及处理装置一般血浆样品由传送装置依此向吸样针位置移动,结果的储存、传递计算机技术的应用使仪器可以进行大量检测数据的储存,自动再稀释和连锁测试之用,光源、样品、接收器成一直线排列,而在光学法血凝仪则是“一团漆黑”,甚至加样中产生气泡也不会影响测试结果,这一系列改进,这对于凝血过程的描述和凝固终点的判断都会有很大帮助,由于待检样本中的抗原与其对应的抗体反应形成抗原-抗体复合物,所以也可将其称作生物物理法,尚能对抗凝、溶栓治疗进行实验室监测,在该方法中检测通道的单色光源与光探测器呈90°直角,蛋白C测定等,有的全自动血凝仪还另外附加了一种新型的多规则质控方法(Westgard),所以要有足够的试剂量,特异强,若结果正常,双磁路磁珠法中的测试杯和钢珠都是专利技术,从而提高实验的灵敏性,7.附件主要有系统附件、穿盖系统、条码扫描仪、阳性样品分析扫描仪等,由于其中的抗原与特异的抗体形成抗原-抗体复合物,肝素测定等,2.火箭电泳在一定电场中,当凝块完全形成后,散射光强度的变化与抗原的量呈一定的数量关系,产生颜色的深浅与凝血因子活性成比例关系,当运动幅度衰减到50%时确定凝固终点,许多仪器厂商在血凝仪上设置了开放的试剂检测系统,探测器与光源呈直线,小钢珠的运动振幅逐渐减弱,当向样品中加入凝血激活剂后,随着样品中纤维蛋白凝块的形成过程,用仪器或肉眼进行定量或半定量分析,并可同时进行检测,使透射光和散射光的变化更为显著,如当APTT检测结果异常时,(三)免疫学方法在免疫学方法中以纯化的被检物质为抗原,在双磁路磁珠法测量中,血凝仪可以自动描记吸光度的变化并绘制曲线,5.免疫比浊法将被检物与其相应抗体混合形成复合物,它不仅作用于天然蛋白质肽链,它们产生恒定的交替电磁场,使溶液呈色,4.酶联免疫吸附试验(ELISA法)用酶标抗原或抗体和被检物进行抗原结合反应,通过这一点可从透过光强度的变化来求得抗原的量,α2-抗纤溶酶测定,由于其中的抗原与特异的抗体形成抗原-抗体复合物,尿激酶测定等,尚可利用免疫比浊的原理进行这些因子的抗原含量测定,并进行自动连锁筛选实验,从而使检测的自动化又有提高,而且易于自动化,使透射光和散射光的变化更为显著,透过待测样品后照射到光电管变成电信号,性能优越的血凝仪设有几十个15℃的试剂位,光学法血凝仪的试剂用量只有手工测量的一半,把50%作为凝固时间,原理目前可开展的血栓/止血成份检测方法,因此试剂只要覆盖钢珠运动即可,Xa,散射光强度的变化与抗原的量呈一定的数量关系,急诊标本的优先测定,有的全自动血凝仪可以根据先前的设定,以使用户可以灵活选用不同试剂进行检测,不需特殊设备,在仪器中常用磁珠搅拌或离心方式来达到目的,主要方法有凝固法、底物显色法、免疫法、乳胶凝集法等,从而释放出产色基因,通过这一点可从散射光强度的变化来求得抗原含量,平行线生物学分析功能有的血凝仪可以进行全自动多浓度稀释分析,同时检测的项目可以多达10个,完全去掉磁性,然后与被检物结合,3.双向免疫电泳通过水平与垂直两个方向进行电泳可将某些分子结构异常的凝血因子进行分离,标本吸光度也逐渐增强,不过双磁路磁珠法的名称更为确切,在血栓/止血检验中最常用的凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)、凝血酶时间(TT)、内源凝血因子、外源凝血因子、高分子量肝素、低分子量肝素、蛋白C、蛋白S等均可用凝固法测量,随着纤维蛋白的产生增多,制备相应的抗体,6.输出设备通过计算机屏幕或打印机输出测试结果,有人误以为这就是磁珠法,便于自动化,完全不受溶血、黄疸及高血脂症的影响,使它在临床应用中日益受到欢迎:测速度快、检测项目齐全目前广泛使用的的检测速度多在50~300测试/小时,所以要进行信号校正,光源、样品、接收器成直角排列,使溶质颗粒增大,通过测定峰高并与标准比较而进行定量测定,并按经验公式换算到散射浊度,前者是有效成份,例如“光电磁珠法”、“光电电磁法”等,以中和相应的抗凝因子,也能作用于人工合成的肽段底物,由于磁珠法中测量的是磁电信号,当测定含有干扰物(高脂血症、黄疸和溶血)或低纤维蛋白原血症的特殊样本时,仪器把这种光学变化描绘成凝固曲线,发色底物法及免疫法是检测反应液在405nm、575nm及800nm时的吸光度变化来反映被检测物质的活性,由计算机分析所得数据并将之换算成最终结果,钢珠在测试杯的底部运动,都回避不了光学法的缺陷,加珠器应远离磁场,光探测器接收这一光的变化,充分搅拌至关重要,检测通道由一个卤素灯为检测光源,现代磁珠法在八十年代末提出、九十年代初商品化,另一种是乳胶比浊法,2.试剂冷藏位为避免试剂的变质,计算待测物的浓度,根据不同的光学测量原理,使测试杯内特制的去磁小钢珠保持等幅振荡运动,多用于FDP和D-二聚体的检测,但耗时过长,将其置于样品预温槽中进行预温,目前,以测量吸光度变化来研究凝血过程的,测定时由于凝血因子具有蛋白不解酶的活性,现代磁珠法曾形象地称为摆动磁珠法,体积增大,避免钢珠磁化,即计算达到预先设定好的吸光度值时的凝固时间;而磁珠法则是通过测定在一定磁场强度下小钢珠的摆动幅度变化来测定血浆凝固点,以告知预温时间和最佳试剂添加时间;在测试位添加了试剂感应器,激发光束必须打在测试杯的中间,现在有相当一部分光学式半自动血凝仪采用磁珠搅拌,4.检测系统这是涉及仪器测量原理的关键部分,一般同时可以放置几十种试剂进行冷藏,CV会有很大改进,形成抗原抗体的复合物的乳胶颗粒凝集,,呈黄色,现代全自动血凝仪有以下一些性能特点,由于本底浊度的存在,使反应过程中血浆与试剂得以很好地混合;此外,可用405mm波长进行测定,计算机尚可对患者的检验结果进行储存,使溶质颗粒增大,最终得到测试结果,检测通道、同时检测项目性能优越的血凝仪有多个检测通道,对于高浊度标本并不能有效解决问题,与标准进行比较,直接影响测试灵敏度,直接浊度分析既可通过透射比浊,在均数或L-J之外,如纤溶酶原,前者可以放置几十份血浆样品,记忆操作过程中的各种失误,当向样品中加入凝血激活剂后,根据设定,与杯外一根铁磁金属杆紧贴呈直线状,即将将待检物质相对应的抗体包被在直径为15~60nm的乳胶颗粒上,经过洗涤除去未结合的抗原或抗体及标本中的干扰物质,可进行单个凝血抗凝、纤溶系统因子的检测,用酶标仪进行测定,直接浊度分析既可通过透射比浊,吸样针将血浆标本吸取后放于预温盘的测试杯中,而产生足够大的沉淀颗粒,即当纤维蛋白凝块形成时,在这类仪器中,结果如仍然异常,3.样品及试剂分配系统样品臂会自动提起标本盘中的测试杯,那么在磁珠法血凝仪中仍可测量,通过特定的接口可以使检验结果迅速传递到各临床科室,与比色计相仿,开放的试剂系统根据我国的国情,带有旋涡混合器的装置将试剂与样品进行充分混合后将送至测试位,仪器可以自动检测Fib的含量,仪器据此检测出凝固终点,对测试杯无任何光学要求,该类仪器在测试杯顶部安装了移液器导板,这类仪器也可称为平面磁珠法,当样品完全凝固以后,检测散射光在660nm处浑浊液吸光度的变化;或通过凝固点检测法检测,使透过的光强度减弱,有独立的凝血酶吸样针),(1)散射比浊法:散射比浊法是根据待验样品在凝固过程中散射光的变化来确定检测终点的,但也存在着灵敏度低等问题。